上海研制成功了核酸检测血液

中华人民共和国产品质量法

    流感病毒长期以来一直严重威胁着人类的健康，特别是近年来禽流感的暴发，使得对抗流感病毒药物的研究更具现实意义和紧迫性。目前，正式上市的抗流感药物大体分为两类：M2离子通道阻断剂和NA抑制剂。但是，由于现有药物在临床上广泛应用，流感病毒发生变异，对这些药物产生了不同程度的耐药性，离子通道阻断剂存在对B型流感病毒无效和神经毒性等缺陷，因此，对现有药物进行结构改造并寻找新药物作用靶点是今后的主要发展方向。

■烷胺类耐药严重
　　
　　属于M2离子通道阻断剂的烷胺类药物因为应用较为广泛，耐药性产生的情况最为严重。烷胺类药物与M2蛋白跨膜区25～43位残基中个别氨基酸发生替换密切相关，现已证实1.26F，V27A，A30T，S31N，G34E位中的氨基酸只要有1个或1个以上的变异就会导致耐药株的出现。1999年有学者报道，在每年流行的A型流感病毒中对烷胺类约物耐药毒株的比例很低，基本在l％～2％的背景水平，但是到了2005年，美国CDC报道，从2003年开始耐药性毒株的比例呈明显上升的趋势，在某些国家和地区耐药性毒株比例高达60％以上。因此，如果发生全球流感大流行，采用金刚烷胺和金刚乙胺预防和治疗甲型流感有可能无效。
　　
　　研究显示，在体外暴露于金刚烷胺和金刚乙胺的病毒很快就会产生耐性，在体内开始治疗几天后也同样很快出现耐药性。在接受药物治疗的儿童和成人中均有30％在治疗的5天之内就出现了耐药病毒。这些具有耐药性的突变株也能引起典型的流感症状。因此应避免接受治疗的患者与易感人群之间的接触。针对流感病毒和禽流感病毒这类变异性非常强的病毒，在用药治疗时，必须谨慎。应当尽快建立流感病毒对金刚烷胺类药物耐药的监测系统，指导临床合理用药，避免耐药毒株的出现。

■NA抑制剂已有耐药“苗头”
　　
　　神经氨酸酶（NA）抑制剂通过选择性地抑制A、B型流感病毒的神经氨酸酶，使病毒难以释放，并促进已释放的病毒相互凝聚，继而死亡。当一种新的流感病毒出现时，针对该病毒的疫苗尚未生产出来，可以将神经氨酸酶抑制剂作为抗新流感病毒的第一线药加以使用。
　　
　　目前。临床上常用的神经氨酸酶抑制剂有扎那米韦和奥司他韦。还有一种名为帕拉米韦，是一种以流感病毒表面糖蛋白神经氨酸酶为作用靶点的新型环戊烷类抗流感药物，是继扎那米韦和奥司他韦之后新型NA抑制剂。2000年，该药由澳大利亚国立大学药学院研究人员在分析唾液酸、扎那米韦、奥司他韦与NA的相互作用机制及构象关系的基础上设计并合成，与环基团分别作用于流感病毒NA结构中不同的活性位点区域。帕拉米韦分子上多个基团分别作用于流感病毒NA分子的多个活性位点，强烈抑制NA的活性，阻止子代病毒颗粒在宿主细胞的复制和释放，从而有效地预防流感和缓解流感症状。
　　
　　国外对帕拉米韦抗病毒研究结果显示，该药能有效抑制各种流感病毒株的复制和传播过程，具有耐受性好、毒性小等优点。帕拉米韦的合成工艺较简易、成本较低，在体外可特异性和选择性地抑制A型和B型流感病毒NA，能有效抑制各种流感毒株的复制和传播。帕拉米韦不易出现耐药性，临床试验显示口服该制剂能显著减少鼻洗液病毒滴定度，无明显副作用。该制剂对A、B型流感病毒的活性比扎那米韦和奥司他韦强，是一个具有潜在应用价值的抗流感新药。
　　
　　虽然病毒对NA抑制剂的耐药率仅约2％，但近年来，已有不少耐药病例的报告。耐药毒株的产生有两条途径：一是由于病毒的RNA发生突变，使NA活性中心的氨基酸(如119位、292位氨基酸)发生改变，酶功能受损；另一途径是NA受体结合点发生变化，与受体亲和力降低。研究发现，病毒NA的119或274位的氨基酸残基发生改变，则会出现至少耐一种NA抑制剂的现象，而在病毒NA的l52或292位的氨基酸残基发生改变，则会出现NA抑制剂之间的交叉耐药现象。
　　
　　研究发现帕拉米韦的耐药突变基因存在于病毒NA的58位和211位的氨基酸残基上，而在病毒的HA上暂时没有发现耐药基因的存在。但实验证实，临床应用的耐药发生几率极低，不会限制其在临床上的应用。

■以血凝素为靶点寻找新药
　　
　　血凝素（HA）蛋白是位于流感病毒表面的一个重要糖蛋白，在转录后首先表达为无活性的HAO，然后经过蛋白酶催化水解为两个活性的多肽亚单位HAl和HA2。实验证实，HAl介导病毒与感染细胞受体上唾液酸之间的吸附作用；HA2引导病毒包膜和核内体膜的融合。
　　
　　目前，以HAl和HA2为靶点，已经发现了一些有抗流感病毒活性的化合物。一种是流感病毒吸附抑制剂，唾液酸类似物可以诱使HAl链上的受体结合位点与之结合，从而干扰或阻断病毒的吸附作用。另一种是病毒膜融合抑制剂，流感病毒与核内体膜发生融合是病毒基因组进入细胞并进行复制的关键步骤。研究表明，流感病毒HA2链在核内体pH降至5左右时发生构象变化，N端的融合肽暴露并插入核内体膜中，引起两者膜融合。目前文献报道的流感病毒膜融合抑制剂多数是通过抑制pH诱导的HA构象发生变化发挥抗病毒作用，其中代表性药物是Stachyflin。

■基因生化药物初露端倪
　　
　　反义寡核苷酸(ODN)包括反义RNA和反义DNA，通常由15～20个核苷酸组成，为防止细胞内核酸酶的分解作用，常将其进行化学修饰。将它们运送到靶细胞，只产生短效应，不会留下长效的遗传效应，这在前期研究尚未探明其副作用的前提下，有较好的安全性：其用量及作用的靶序列可以人为控制，原则上不会干扰其他基因结构和它们自身正常的调控方式；尤其是反义寡核苷酸不会产生耐药性，还可采用多点反义处理增强抑制效果。脂质体包裹的硫代膦酸酯类反义寡核苷酸(s-ODN)静脉注射给甲型流感病毒感染的小鼠，结果显示，针对流感病毒PB2一AuG的一段寡核苷酸显著地延长了小鼠的平均存活时间，提高了存活率，并具有剂量依赖性，为ODN在流感治疗中的应用带来了新的希望。
　　
　　RNA干扰（RNAi)是基因转录后沉默的一种方式，是生物界古老而且进化高度保守的现象之一。RNAi是通过siRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径，由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA。RNAi具有生物催化反应特征，反应中需要多种蛋白以及ATP参与。研究者分别构建针对NP、PA及同时干扰NP和PA的三种siRNA表达质粒。结果，三种siRNA表达质粒可明显抑制NP或PA基因的转录和表达，并有效地抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖。新近的研究表明，siRNA可通过沉寂同源的病毒基因或沉寂与病毒复制有关的宿主基因，使病毒在感染的不同时期受到抑制，且很少出现副作用，是一个潜在的、强有力的抗病毒武器。